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ELISA常見封閉液簡介

發布時間: 2022-11-21  點擊次數: 229次
不同的實驗中我們都會遇到封閉液,像常規的ELISA實驗中封閉液也是不可queshao的,那讓我們來看看哪些是ELISA實驗中常見的吧!
     ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
  • ELISA實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;
  • 封閉液一般是BSA(牛血清白蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠等或者是Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST等。
  • 加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。
  • 蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數選擇前者。
除此外,封閉劑還可用5%的脫脂乳,0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結合上的明膠。
  • SA是常用的封閉劑,成分單一適用于大多數情況。若免疫原是偶聯BSA的, BSA有很強的免疫原性,會導致產生很多的針對BSA的抗體,為避免交叉反應,不能用BSA、脫脂奶粉等封閉,可以選用酪蛋白或無蛋白的封閉劑封閉。大部分BSA中有少量的抗體殘留,會導致抗原/抗體之間的交叉反應,產生高背景,雜帶較多或使得本底水平增高。

  • 封閉血清的原理主要有兩點,一是待檢樣本會有些與蛋白非特異性結合的物質,從而導致背景過高,因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結合,從這點看,BSA和血清沒有明顯區別。二是待檢樣本中可能會有Fc受體,可以和抗體恒定區結合,與抗體特異性無關,封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結合。BSA則無法封閉Fc受體。

  • 脫脂奶粉的優點是價錢便宜,但是由于成分相對復雜,所以適用范圍要狹窄一些。磷酸化抗體也許會導致背景增加,此外,因為自身含有,不能用于標記的抗體系統。

  • 酪蛋白 和BSA作用類似,普通酪蛋白不易溶解。中性和堿性條件下帶有負電性,與同樣帶負電荷膠體金之間存在排斥力,而膜一般都是帶正電荷,會與酪蛋白有一定的吸附作用,用酪蛋白封閉效果好些。無蛋白化合物  甲醛:與PVDF膜表面的微結構反應或者結合,使之失去結合蛋白的疏水力或者空間結構域。去污劑(吐溫-20):Tween-20是一種非離子型去污劑,有復性抗原的作用,與膜疏水性吸附,有很強的對非特異性吸附的洗脫作用,同樣可以降低蛋白間的疏水作用,可提高特異性的識別能力。

 

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